心停止後モデル動物を作成し、脳、心臓、肺、腸管、血漿を摘出し、以下のプロトコールで処理を行い、メタボローム解析(GS/MS)を行った。.① 臓器を凍結乾燥し、ジルコニアビーズを加え、チューブごと液体窒素で凍結した.②ボールミルを用いて20 Hz, 5 minで臓器を粉砕した.③ 2.0 mLエッペンドルフチューブに乾燥重量15 mg (0.00まで計測)以上の臓器粉末を入れた.④Mix Solvent (MeOH: H2O: CHCl3 =5: 2: 2)を臓器濃度が15 mg/mLとなるように添加した. ⑤ 20 secボルテックス後、16,000 rpm, 3 minで遠心した.⑥新しい1.5 mLエッペンドルフチューブに上清900 µLを加え、その後、MilliQ (未滅菌)を400 µL添加した.⑦16,000 rpm, 3 minで遠心し、新しい 1.5 mLエッペンドルフチューブに水層を800 µL, クロロホルム層を100 µL取得した.⑧遠心エバポレータで有機溶媒を留去した.⑨有機溶媒留去後、-80˚Cで凍結し、凍結乾燥を行った.⑩凍結乾燥サンプルに40 mg/mL Methoxyamine hydrochloride pyridine溶液 10 µL, 0.75 mg/mL d27-Myristic acid n-hexane溶液10 µLを添加した.⑪加温振盪機で30˚C, 1,200 rpm, 90 minで振盪した.⑫N-Methyl-N-trimethylsilul-trifluoroacetamide (MSTFA)+ 1% TMCSを90 µL添加し、37˚C, 1,200 rpm, 30 minで振盪した.⑬16,000 rpmで遠心し、上清を分析サンプルとした. 解析の結果、各臓器における水層、クロロホルム層において、水素ガス介入群で有意な差異を認めた代謝産物を複数検出した。今後、これらの意義について解析を継続する。
After post-cardiac arrest syndrome model animals were created, and the brain, heart, lungs, intestines, and plasma were removed and metabolome analysis was performed. As a result of the analysis, multiple metabolites showing significant differences in the hydrogen gas intervention group were detected in the aqueous layer and the chloroform layer in each organ. In the future, we will continue to analyze these significance.