これまでの研究で申請者らは、aurora kinase阻害薬耐性細胞でAKT3の発現の亢進と活性化が起こっていること、およびmyristoyl AKT3導入細胞ではAURK阻害薬が誘導するaneuploidyの出現が抑制されることを示してきた。本研究では、AKT3の発現が、細胞分裂のM期において、3個以上の紡錘体極が存在するmultipolar spindleの出現頻度にどう影響するかについて検討した。阻害薬非存在下の通常の培養条件において、ヒト結腸癌HCT116細胞およびヒト卵巣癌A2780細胞のmultipolar spindleの出現頻度は、それぞれ2%、12%であった。HCT116細胞に活性型AKT3であるmyr-AKT3を安定発現させたHCT116/AKT-14細胞およびHCT116/AKT-18細胞のmultipolar spindleの出現頻度は、ともに3%であった。Aurora kinase阻害薬VX-680は、HCT116細胞のmultipolar spindleの出現頻度を8%に増大させたが、HCT116/AKT-14細胞およびHCT116/AKT-18細胞のmultipolar spindleの出現頻度は4%であり、その増大は少なかった。AKT阻害薬AZD5363の処理でも、同様の傾向を示した。したがって、HCT116細胞において、活性型AKT3は、阻害薬が誘導するmultipolar spindleの出現頻度を低下させることが示された。A2780細胞に活性型AKT3であるAKT3（E17K）を安定発現させたA2780/AKT-26細胞およびA2780/AKT-27細胞のmultipolar spindleの出現頻度は、それぞれ2%、3%であった。したがって、A2780細胞においては、活性型AKT3は、阻害薬非存在下の通常の培養条件においても、multipolar spindleの出現頻度を低下させた。また、Aurora kinase阻害薬VX-680、AKT阻害薬AZD5363は、A2780細胞、A2780/AKT-26細胞およびA2780/AKT-27細胞のmultipolar spindleの出現頻度を増大させたが、A2780/AKT-26細胞およびA2780/AKT-27細胞におけるこれらの阻害薬存在下でのmultipolar spindleの出現頻度は、A2780細胞より低かった。以上より、活性型AKT3は、multipolar spindleの出現頻度を低下させると結論した。
In previous studies, we reported the upregulation of AKT3 in cancer cells resistant to aurora kinase inhibitors (AURKis). We also reported that the levels of AURKi-induced aneuploidy in myristoyl AKT3-transfected cells were lower than that of the parental cells. In the present study, my laboratory members and I evaluated the effect of AKT3 on the formation of multipolar spindles characterized by more than three spindle poles in the mitotic phase of cell division. In normal culture condition, frequencies of multipolar spindle formation in human colon HCT116 and human ovarian A2780 cells were 2 % and 12 %, respectively. Frequencies of multipolar spindle formation in HCT116/AKT-14 and HCT116/AKT-18 cells that stably express myristoyl AKT3 were approximately 3 %. AURKi VX-680 increased the frequency of multipolar spindle formation in HCT116 cells to 8 %, however, those in HCT116/AKT-14 and HCT116/AKT-18 cells were only 4 %. Similar results were obtained when cells were treated with AKT inhibitor AZD5363. These results show that active AKT3 lowered the frequencies of inhibitors-induced multipolar spindle formation of HCT116 cells. Frequencies of multipolar spindle formation in A2780/AKT-26 and A2780/AKT-27 cells that stably express E17K-AKT3 were 2 % and 3 %, respectively. This result shows that active AKT3 lowered the frequencies of multipolar spindle formation of A2780 cells in the absence of inhibitors. VX-680 and AZD5363 increased the frequencies of multipolar spindle formation in A2780, A2780/AKT-26, and A2780/AKT-27 cells. The frequencies of multipolar spindle formation in the inhibitors-treated A2780/AKT-26, and A2780/AKT-27 cells were lower than that in the inhibitors-treated A2780 cells. These results show that active AKT3 lower the frequency of multipolar spindle formation.