本年度は事業計画に従い、これまでの研究を継続して①脾臓細胞中の免疫細胞の解析をフローサイトメトリーを用いて行った。CD4+ T細胞における免疫チェックポイント分子CTLA-4+細胞の割合およびCTLA-4+CD4+細胞数を評価した。その結果、CLP処置を行う前では、DNによるCTLA-4発現への影響はみられなかった。一方、CLP処置を行うと両群においてCD4+ T細胞におけるCTLA-4+細胞の割合が上昇し、DN群ではSham群よりも有意に高い値を示した。また敗血症増悪と関連が報告されているmyeloid-derived suppressor cells、さらに脾臓以外組織中に存在する免疫細胞の関与として腹腔内のマクロファージ細胞集団の解析も行った。その結果、これら細胞集団はCLP後においてDN処置の有無の影響はなかった。そこで脾臓組織におけるこれらT細胞疲弊現象と骨格筋との関与を明らかにするために、マウス脾臓細胞から単離した細胞に対してShamマウスまたはDNマウスのCLP後の血清または骨格筋ホモジネートを添加するexvivo実験を行った。その結果、DNマウスのCLP後の骨格筋ホモジネートを添加した際に、CTLA-4+CD4+T細胞の増加が認められた。以上より、DNにより誘導される敗血症後のT細胞性免疫の抑制には骨格筋由来の因子が関与してる可能性が考えられた。今後は骨格筋ホモジネート中の成分のうち、エクソソームを含めて因子の特定を試みる。
This year, I analyzed the immune cell population in the spleen under CLP-induced sepsis with or without denervation using flow cytometry. We evaluated the CD4+ T-cell population that expressed CTLA-4, an immune checkpoint molecule, using a flow cytometer. As a result, sciatic denervation did not affect these cell populations before CLP. On the other hand, after CLP treatment, the percentage of CTLA-4 + T-cells among CD4 + T cells was increased in both groups, and the DN group showed a significantly higher value than the Sham group. In addition to T-cell analysis, I also evaluated the macrophage cells in the peritoneal cavity and myeloid-derived suppressor cells, which are reported to aggravate sepsis in the spleen. However, these cell populations were not affected by the presence or absence of DN treatment after CLP. Therefore, to clarify the involvement of skeletal muscle in these T-cell exhaustion phenomena in spleen tissue, I conducted ex vivo experiments in which serum or skeletal muscle homogenate after CLP of Sham or DN mice was added to splenocyte cells. As a result, an increase in CTLA-4 + CD4 + T cells was observed when skeletal muscle homogenate after CLP of DN mice was added but not in serum. Therefore, the factors derived from denervation-induced atrophic skeletal muscle may be involved in T-cell exhaustion after septicemia in DN mice. I further investigate the specific factors such as exosomes that would be related to exacerbation in the future.
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