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KO12003001-00002020-0054  
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本文公開日
 
タイトル
タイトル 初期胚発生と全能性制御におけるトランスポゾンの役割  
カナ ショキハイ ハッセイ ト ゼンノウセイ セイギョ ニ オケル トランスポゾン ノ ヤクワリ  
ローマ字 Shokihai hassei to zennōsei seigyo ni okeru toransupozon no yakuwari  
別タイトル
名前 Role of retrotransposons in early embryonic development and totipotency control  
カナ  
ローマ字  
著者
名前 村野, 健作  
カナ ムラノ, ケンサク  
ローマ字 Murano, Kensaku  
所属 慶應義塾大学医学部基礎教室  
所属(翻訳)  
役割 Research team head  
外部リンク  
 
出版地
 
出版者
名前 福澤基金運営委員会  
カナ フクザワ キキン ウンエイ イインカイ  
ローマ字 Fukuzawa kikin un'ei iinkai  
日付
出版年(from:yyyy) 2021  
出版年(to:yyyy)  
作成日(yyyy-mm-dd)  
更新日(yyyy-mm-dd)  
記録日(yyyy-mm-dd)  
形態
1 p.  
上位タイトル
名前 福澤諭吉記念慶應義塾学事振興基金事業報告集  
翻訳  
 
 
2020  
 
開始ページ  
終了ページ  
ISSN
 
ISBN
 
DOI
URI
JaLCDOI
NII論文ID
 
医中誌ID
 
その他ID
 
博士論文情報
学位授与番号  
学位授与年月日  
学位名  
学位授与機関  
抄録
マウスの内在性レトロウイルスMuERVL(マーブル)はゲノムの1000ヶ所以上に存在するレトロトランスポゾンの一つである。初期胚発生の2細胞期に活性化した後、徐々に減少し着床前の胚盤胞ではほとんど検出されなくなる。また、ES細胞集団のうち0.1%の細胞は「2細胞期様細胞(2C-like細胞)」と呼ばれ、胚体外組織に分化が可能な全能性を保持していることが報告されている(Macfarlan et al., Nature 2012)。興味深いことに、「2C-like細胞」はMuERVLの構造タンパク質であるGagを高発現している。しかし、MuERVL自体がコードするタンパク質やRNAが、どのように初期胚発生に関わるのか、どのようにES細胞の全能性獲得に寄与するのかについてはほとんど手付かずの課題となっている。本研究では、初期胚発生と全能性制御機構におけるMuERVLの役割解明に取り組んでいる。
MuERVLの機能を明らかとするため、2細胞期特異的転写因子DUXを誘導発現することができるES細胞株を構築した。転写因子DUXはES細胞を2C-like細胞へと遷移させ、同時にMuERVL LTR制御下のFlag-Gagを発現誘導することができる。抗Flag抗体と独自に作製したモノクローナル抗Gag抗体を用いて相互作用因子の探索を行ったところ、転写因子DUXを同定した。DUX抗体を作製し、免疫沈降法によりGagとDUXの相互作用を確認した。DUXの転写促進活性を検討するため、MuERVL LTRの下流にルシフェラーゼ遺伝子を配置したレポーターシステムを構築した。この系にGagを発現させると、DUXによる転写活性が抑制された。以上の結果から、マウス2細胞期胚におけるGagの発現は2細胞期特異的なトランスクリプトームから脱却し、胚発生を促すと考えられる。現在、2細胞期後期におけるGagとDUXの細胞内局在について検討している。
The mouse endogenous retrovirus MuERVL is one of the retrotransposons present in more than 1000 copies in the genome. After activation during the two-cell stage of early embryogenesis, it gradually decreases and is almost undetectable in the blastocyst before implantation. It has also been reported that 0.1% of cells in the ES cell population are termed "two-cell stage like cells (2C-like cells)" and retain their pluripotency to differentiate into extracellular tissues (Macfarlan et al., Nature 2012). Interestingly, the 2C-like cells highly express Gag, a structural protein of MuERVL. However, how the proteins and RNAs encoded by MuERVL itself are involved in early embryonic development and how they contribute to the acquisition of pluripotency in ES cells remain unknown. In this study, we are trying to elucidate the role of MuERVL in early embryogenesis and totipotency control.
To clarify the role of MuERVL, we constructed an ES cell line capable of inducing expression of the 2C stage-specific transcription factor DUX. It transitions ES cells to 2C-like cells and simultaneously induces the expression of Flag-Gag driven by MuERVL LTR. Immunoprecipitations using anti-Flag and Gag antibodies, followed by MS analysis, identified DUX. We raised an anti-DUX antibody and confirmed the interaction between Gag and DUX by immunoprecipitation and western blotting. To reveal DUX control mechanism, we establish a reporter system consisting of luciferase gene driven by MuERVL LTR. Expression of Gag inhibited the transcription activity of DUX. This result suggested that transient expression of Gag in 2C embryo promotes the transition of transcriptome from 2C stage, and therefore early embryogenesis. We are going to examine cellular localization of DUX and Gag in 2C late-stage embryo.
 
目次

 
キーワード
 
NDC
 
注記
申請種類 : 福澤基金研究補助
 
言語
日本語  

英語  
資源タイプ
text  
ジャンル
Research Paper  
著者版フラグ
publisher  
関連DOI
アクセス条件

 
最終更新日
Mar 28, 2022 10:40:44  
作成日
Mar 28, 2022 10:40:44  
所有者
mediacenter
 
更新履歴
Mar 28, 2022    インデックス を変更
 
インデックス
/ Public / 塾内助成報告書 / 福澤諭吉記念慶應義塾学事振興基金事業報告集 / 2020年度
 
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