乳がん細胞株MCF-7を用いて、Check point kinase（CHK）1阻害薬prexasertibに対する耐性細胞MCF-7/PRE（PRE1-2、PRE1-3、PRE1-4）、WEE1阻害薬adavosertibに対する耐性細胞MCF-7/ADA（ADA3-1、ADA4-1、ADA4-2）を樹立した。本研究では、耐性細胞株の分子標的薬に対する交差耐性の検討を行った。
MCF-7/PRE細胞は、MCF-7細胞と比較してprexasertibに対して10倍以上の耐性を示した。MCF-7/PRE細胞は、他のCHK1阻害薬AZD7762とRabusertibに対して耐性を示した。また、MCF-7/PRE細胞は、WEE1阻害薬adavosertibに対しても交差耐性を示した。
MCF-7/ADA細胞は、MCF-7細胞と比較して、prexasertib、AZD7762、PLK阻害薬BI2536、GSK461364に対して交差耐性を示した。上記の薬剤感受性の結果より、CHK1、WEE1耐性は、CHK1、WEE1、PLKの分子の相互作用に関係する可能性を示唆している。
Enhancer of zeste homolog 1/2（EZH1/EZH2）阻害薬valemetostatの濃度を上げていき、それぞれ3 µM、4 µMの条件下でも増殖を示すMCF-7/VAL（VAL-3 mix、VAL-4 mix）細胞を樹立した。MCF-7細胞と比較して、MCF-7/VAL3-mix、MCF-7/VAL4-mix細胞は、valemetostatに対してそれぞれ13、23倍の耐性を示した。現在は、これらの耐性細胞株のクローニングを行っている。
今後はDNA障害を引き起こす薬剤に対する薬剤感受性や、CHK1阻害薬、WEE1阻害薬の処理に対する細胞周期に与える影響を検討していく。また、Agilent cDNA microarray解析により、耐性細胞株で発現が増大あるいは低下している遺伝子群を特定する。この中から薬剤耐性の原因となる遺伝子を検討する。
We established the MCF-7/PRE (PRE1-2, PRE1-3, PRE1-4) cells, which showed resistance to the Check point kinase (CHK)1 inhibitor prexasertib, and the MCF-7/ADA (ADA3-1, ADA4-1, ADA4-2) cells, which showed resistance to the WEE1 inhibitor adavosertib, using the breast cancer cell line MCF-7. In the present study, we investigated cross-resistance of the resistant cell lines to molecular target drugs.
MCF-7/PRE cells showed 10-fold higher resistance to prexasertib, compared to MCF-7 cells. MCF-7/PRE cells showed resistance to other CHK1 inhibitors AZD7762 and Rabusertib. MCF-7/PRE cells also showed cross-resistance to the WEE1 inhibitor adavosertib.
MCF-7/ADA cells showed cross-resistance to prexasertib, AZD7762, PLK inhibitors BI2536 and GSK461364, compared to MCF-7 cells. The above results of drug sensitivity suggest that CHK1 and WEE1 resistance may be related to the interaction of CHK1, WEE1 and PLK molecules.
We increased the concentration of the Enhancer of zeste homolog 1/2 (EZH1/EZH2) inhibitor valemetostat, and established the MCF-7/VAL (VAL-3 mix, VAL-4 mix) cells that showed proliferation even under 3 µM and 4 µM conditions, respectively. MCF-7/VAL3-mix and MCF-7/VAL4-mix cells were 13- and 23-fold higher resistance to valemetostat, respectively. Currently, we are cloning these resistant cell lines.
In the future, we will investigate drug sensitivity to DNA-damaging agents and the effect of CHK1 and WEE1 inhibitor treatment on the cell cycle. In addition, we will use Agilent cDNA microarray analysis to identify genes whose expression is increased or decreased in resistant cell lines. From these genes, we aim to identify genes that cause drug resistance.