The modification and synthesis of bacterial cells, predominantly targeting metabolic genes, is a relatively new area of study with potential for industrial applications. Such modifications require efficient methods for gene collection and clustering. We have developed a novel method for multiple gene clustering, the gapped polymerase chain assembly(GPCA) method. This method involves the use of overlapping primers in PCR and is characterized by 4 sequential polymerase chain reactions. Using GPCA, we successfully connected 4 genes of the Escherichia coli glycolysis pathway and confirmed the structure of the resulting construct through DNA sequencing and restriction enzyme mapping.　近年、工業応用などを目的として微生物を改変する合成生物学という新たな分野が注目されている。細菌の改変は主に代謝遺伝子の操作であり、そのためには遺伝子を効率よく収集し、集積することが欠かせない。このような遺伝子集積を高速に行うため、PCRを用いたマルチプルDNA断片連結手法であるGPCAを開発した。GPCAは４つのPCRによって複数のDNA断片を目的の順番に沿って連結する。本手法を用いて大腸菌解糖系遺伝子を4つ連結することに成功し、制限酵素マッピングおよびシーケンシングによる構成確認を行った。

研究論文:自由論題